qpcr原理及應(yīng)用 qpcr原理及操作步驟
2022-04-19 天奇生活 【 字體:大 中 小 】
qpcr原理:通過(guò)凝膠電泳、毛細(xì)管電泳等方法對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。qpcr應(yīng)用于大學(xué)及研究所、CDC、檢驗(yàn)檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠(chǎng)等。
1、qpcr是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。DNA由脫氧核苷酸組成的大分子聚合物。脫氧核苷酸由堿基、脫氧核糖和磷酸構(gòu)成。其中堿基有4種:腺嘌呤(A)、鳥(niǎo)嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)。
2、Real-timePCR是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中,通過(guò)熒光信號(hào),對(duì)PCR進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。逆轉(zhuǎn)錄PCR,或者稱(chēng)反轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR),是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT-PCR中,一條RNA鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ)DNA,再以此為模板透過(guò)PCR進(jìn)行DNA復(fù)制。由一條RNA單鏈轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA(cDNA)稱(chēng)作“逆轉(zhuǎn)錄”,由依賴(lài)RNA的DNA聚合酶(逆轉(zhuǎn)錄酶)來(lái)完成。
3、由于在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時(shí)期,模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系,所以成為定量的依據(jù)。數(shù)字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)。相較于qPCR,數(shù)字PCR可讓你能夠直接輸出DNA分子的個(gè)數(shù),是對(duì)起始樣品的絕對(duì)定量。
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